湿电转膜仪操作规程

　　电泳转印为转移蛋白zui常用的方法，该技术有效、迅速，并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程，即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确，并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。

　　操作步骤：

　　1、转膜时，1张5.5×8.5cm的PVDF膜以及2张6.5×10cm的滤纸需要被准备，由于膜会受到手上的蛋白的污染，必须要戴手套切滤纸和膜。在甲醇中浸没切好的PVDF膜超过15秒即可。

　　2、将浸过的PVDF膜、两张滤纸、两块海绵垫以及转膜用的夹子放置于加有转移液的搪瓷盘里。

　　3、将夹子打开，在转膜液中放入黑的一面，海绵、滤纸、分离胶、PVDF膜、滤纸、海绵由下往上依次放入。

　　4、合好夹子，放入转移槽中，使夹的白面对着槽的红面，夹的黑面对槽的黑面，将电接通，电转移时会有热产生。有较大空隙在槽的一边，降温将事先准备好的冰盒放入。在一个大的盛满冰的容器中放入整个电泳槽（建议使用大的塑料泡沫盒子）。

　　注意：

　　1、在转膜液中进行整个过程，在铺每一层时，气泡要用刮子赶掉，一定不能有气泡留在胶与膜之间。

　　2、要轻轻地撬玻璃板剥胶，用刮子轻轻刮去浓缩胶，将分离胶小心剥下，往滤纸上盖，用手调整使其与滤纸对齐。